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摘要 目的 探讨糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞（LEC）高表达的miR-124在糖尿病性白内障病理反应中的作用及机制。方法 收集糖尿病性白内障患者与健康捐献眼的晶状体前囊膜，并通过高通量测序技术对晶状体前囊膜中的miRNA进行检测。使用EdgeR,利用F检验筛选差异表达miRNA。使用RegRNA检测差异表达miRNA和靶基因的结合关系以及结合位点，并进一步使用qRT-PCR验证miR-124和Bcl-2表达量的相关性。采用人LEC细胞分别转染dsControl、miR-124 inhibitor、dsBcl-2-640、miR-124 inhibitor+dsBcl-2-640,使用Western Blot检测Bcl-2表达量的变化；将各组细胞置于35.5 mmol·L-1高糖环境中培养48 h,利用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 糖尿病性白内障眼和健康对照眼miR-124丰度值分别为281 208和64 669（变化倍数为2.26,P<0.05）,是上调最为显著的miRNAs之一。生物信息学分析显示miR-124可与Bcl-2启动子序列中相对于转录起始位点的核苷酸-645处序列结合。qRT-PCR检测结果表明miR-124与Bcl-2表达量呈负相关性（r=-0.872 9,P=0.023 7）。与空白对照组相比，dsBcl-2-640组LEC细胞Bcl-2蛋白表达显著降低[（0.22±0.03）比（0.41±0.04）,P<0.05],miR-124 inhibitor组显著升高[（0.91±0.09）比（0.41±0.04）,P<0.05],而miR-124 inhibitor+dsBcl-2-640组无明显差异[（0.37±0.03）比（0.41±0.04）,P>0.05]。与空白对照组相比，miR-124 inhibitor组LEC细胞凋亡率显著降低[（11.33±1.86）%比（25.81±2.33）%,P<0.05],dsBcl-2-640组显著增加[（32.30±4.54）%比（25.81±2.33）%,P<0.05],而miR-124 inhibitor+dsBcl-2-640组无明显差异[（23.20±4.30）%比（25.81±2.33）%,P>0.05)]。结论 糖尿病性白内障患者LEC高表达的miR-124可靶向Bcl-2启动子序列诱导LEC细胞凋亡。
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| 关键词 ：
糖尿病性白内障,
miR-124,
Bcl-2,
高通量筛选,
凋亡
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| 基金资助:湖北省卫生和计划生育委员会科研项目(WJ2016F013)； |
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