粉尘螨过敏原Der f 13基因克隆表达与免疫原性鉴定
王媛媛； 林建立； 黄娜娜； 巴金戈； 刘志刚； 刘晓宇
深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所
WANG Yuan-yuan;LIN Jian-li;HUANG Na-na;BA Jin-ge;LIU Zhi-gang;LIU Xiao-yu
摘要 目的克隆表达粉尘螨过敏原Der f 13,并鉴定其免疫原性。方法提取粉尘螨总RNA,通过RT-PCR获得Der f 13的cDNA片段。根据已知Der f 13序列设计出表达引物,再通过已获得的cDNA和引物进行PCR扩增,将扩增产物连接到T载体上并转入克隆菌Top 10中,涂板、培养,挑选阳性菌落,LB/AMP培养送测序。将测序正确的基因转入表达载体PET32中,经酶切鉴定测序再转入表达菌BL21中,表达Derf 13蛋白,纯化、鉴定所得蛋白,并通过Western-blot等方法检测其免疫学活性。结果 RT-PCR结果显示,Der f 13基因片段大小为410 bp;同源性分析表明:本实验所克隆的Der f 13基因与NCBI数据库的Der f 13基因的同源性为95%;SDS-PAGE结果显示,重组质粒PET32-Der f 13在BL21(DE3)中高效表达,重组蛋白分子质量为35 ku,表达后的重组蛋白主要以可溶性蛋白形式存在,经与尘螨过敏患者血清反应,检测出重组蛋白有较强免疫学活性。结论克隆出Der f 13基因,表达和纯化出目的蛋白,并具有免疫原性,为过敏性疾病的诊断和免疫治疗奠定理论基础。
关键词 ：
粉尘螨 ,
过敏原Der f 13 ,
蛋白表达 ,
纯化 ,
免疫原性
基金资助: 国家自然科学基金(91442118、31328014、31400786);广东省高等学校国际暨港澳台科技合作创新平台(2012gjhz0009);深圳市科技计划国际科技合作项目(GJHZ20130408174112021);深圳市科技计划基础研究项目(JCYJ20130329110735981、JCYJ20120613173233810);深圳市南山区研发项目(KC2012JSYB0003A)
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2016, Vol. 56 
