摘要目的 探讨Ⅳ型胶原蛋白1(COL4A1)对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的作用，及其上游调控机制。方法 将COL4A1过表达载体、人着色性干皮病基因(XPD)过表达载体、miR-29a-3p模拟物、miR-29a-3p抑制物、Si-COL4A1、Si-XPD按实验目的转染各组细胞，以空载质粒、NC-模拟物、NC-抑制物、NC-SiRNA作为相应的对照组；qRT-PCR检测COL4A1和XPD mRNA水平；蛋白质印迹法检测COL4A1、XPD和EMT相关蛋白质水平；MTT检测细胞活力；Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力；萤光素酶报告基因实验验证miR-29a-3p和COL4A1的靶向关系。结果 肝癌组织中COL4A1 mRNA[(3.25±1.10) vs (0.88±0.45),P<0.01]和蛋白质[(2.58±0.50) vs (1.00±0.14),P<0.01]水平均高于癌旁组织。SMMC-7721、HepG2(P<0.01)和Hep3B(P<0.05)细胞株的COL4A1 mRNA和蛋白质水平均高于L02细胞。与Hep3B+空载质粒相比，过表达COL4A1促进了Hep3B细胞增殖[(0.48±0.06) vs (0.76±0.09),P<0.01]、迁移[(109.00±9.17)个vs (199.33±15.04)个，P<0.01]、侵袭[(84.67±8.02)个vs (133.00±11.53)个，P<0.01]和EMT(P<0.05)。与HepG2+NC-SiRNA相比，沉默COL4A1抑制了HepG2细胞增殖[(0.62±0.09) vs (0.42±0.03),P<0.01]、迁移[(173.00±12.00)个vs (75.00±7.94)个，P<0.01]、侵袭[(105.33±7.51)个vs (47.00±5.57)个，P<0.01]和EMT(P<0.05)。过表达XPD后，HepG2细胞的COL4A1 mRNA[(1.00±0.09) vs (0.55±0.06),P<0.01]和蛋白质[(1.00±0.09) vs (0.33±0.04),P<0.01]水平较HepG2+空载质粒组下降，沉默XPD在Hep3B细胞中出现了相反的结果[与Hep3B+NC-SiRNA相比：mRNA,(1.00±0.08) vs (2.52±0.25);蛋白质，(1.00±0.09) vs (2.56±0.36),P<0.01]。转染miR-29a-3p模拟物后，HepG2细胞中COL4A1 mRNA[(1.00±0.13) vs (0.47±0.07),P<0.01]和蛋白质[(1.00±0.15) vs (0.36±0.09),P<0.01]水平较NC-模拟物+HepG2下降；而miR-29a-3p抑制物在Hep3B细胞中出现了相反的结果[与NC-抑制剂+Hep3B相比：mRNA,(1.00±0.13) vs (3.30±0.41),P<0.01;蛋白质，(1.00±0.14) vs (2.91±0.30),P<0.01]。miR-29a-3p模拟物逆转了沉默XPD介导的Hep3B细胞COL4A1上调(P<0.01)。结论 COL4A1促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT,并受XPD-miR-29a-3p轴的负性调控。
