|
|
|
| 屋尘螨变应原Der p9基因的克隆表达、纯化及反应原性鉴定 |
| 李平黄娜娜常可欣李诞杨礼腾刘志刚刘晓宇 |
| 深圳大学过敏反应与免疫学研究所深圳大学第三附属医院呼吸科和变态反应科 |
|
|
|
|
摘要 目的克隆表达及纯化屋尘螨第九组变应原(Der p9)蛋白,并鉴定其反应原性。方法提取屋尘螨总RNA,通过RT-PCR克隆Der P9基因,并连接到pET-32a表达载体上,得到的重组质粒pET-32a-Der p9转化至E.Coli BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过镍离子亲和层析纯化目的蛋白;通过Western blotting等方法检测Der p9重组蛋白的反应原性。结果 Der p9基因片段大小约为850 bp,其基因片段与Gen Bank公布的Der p9基因(登录号为AAP57077.1)同源性为81.94%;重组Der p9在BL21(DE3)中可高效表达,分子质量约为47 k Da,表达后的重组蛋白主要以包涵体的形式存在。Der p9重组蛋白与屋尘螨过敏患者血清呈阳性反应,具有反应原性。结论成功克隆并表达出Der p9,通过纯化获得较强反应原性的Der p9重组蛋白,为尘螨过敏性疾病诊断及免疫治疗奠定理论基础。
|
|
| 关键词 ：
屋尘螨,
Der p9,
表达,
纯化,
反应原性;
|
|
|
| 基金资助:国家自然科学基金(31729002、81628001)； 广东省科技计划项目(2014B090901041、2016A020216029)； 深圳市孔雀团队项目(KQTD20170331145453160)； 呼吸疾病国家重点实验室开放基金(SKLRD2018ZJ001)； 广州市科学研究计划重点项目(201804020043)； 深圳市科技计划基础研究项目(JCYJ20160429171931438、JCYJ20160429114659119)； |
| [1] |
喻海琼肖小军陈小可欧阳春艳周一平刘志刚. 屋尘螨提取液皮下注射治疗小鼠过敏性哮喘的机制研究[J]. 南昌大学学报（医学版）, 2019, 59(1): 7-. |
| [2] |
艾素芬黄龙丁剑午. 核糖核苷酸还原酶M2与恶性肿瘤的研究进展[J]. 实用临床医学, 2018, 19(9): 100-. |
| [3] |
牟云鸿陈艳霞涂卫平房向东. 促红细胞生成素对高糖环境下系膜细胞凋亡的影响及其可能机制[J]. 南昌大学学报（医学版）, 2018, 58(6): 11-. |
| [4] |
黄娜娜陈德盛常可欣关律昕杨礼腾刘志刚刘晓宇. 屋尘螨Der p7基因的克隆表达、纯化及过敏原性鉴定[J]. 南昌大学学报（医学版）, 2018, 58(6): 5-. |
| [5] |
卢小丽刘丝荪熊振芳. RAD51C蛋白在卵巢癌组织中的表达及意义[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2018, 42(6): 584-. |
| [6] |
张智张一琼. Foxp3+Tregs及PD1在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床病理意义[J]. 南昌大学学报（医学版）, 2018, 58(5): 54-. |
| [7] |
冯鹏程吴建兵. MLLT3/AF9基因研究进展[J]. 南昌大学学报（医学版）, 2018, 58(4): 99-. |
| [8] |
郑双艳孟超刘清谢彦海. 重金属对褶纹冠蚌Cu/ZnSOD基因mRNA表达和酶活性的影响[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2018, 42(1): 67-. |
| [9] |
戴芳宋莉朱德星邹源. TGF-β1、bFGF双基因修饰骨髓间充质干细胞的实验研究[J]. 南昌大学学报（医学版）, 2018, 58(1): 22-. |
| [10] |
韩雪屈晓展崔勇青胡子颖郑义孔令保. 梅毒螺旋体重组融合蛋白的表达及免疫特性[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2017, 41(06): 572-. |
| [11] |
杨宇秀刘建明. 有机阴离子转运多肽的性质、表达及功能研究进展[J]. 实用临床医学, 2017, 18(05): 96-. |
| [12] |
包怡魏昕周静. 长链非编码RNA在纤维化疾病中的研究进展[J]. 南昌大学学报（医学版）, 2017, 57(02): 92-. |
| [13] |
李婧婧李兴章孙士民张登虹黄春洪. 华游蛇PLIγ的毕赤酵母表达及其抗蛇毒sPLA2活性[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2017, 41(02): 158-. |
| [14] |
龚海波焦丰龙胡蓓娟盛军庆王军花洪一江. 一种池蝶蚌多糖的分离纯化、表征特性及体外抗氧化活性[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2017, 41(02): 166-. |
| [15] |
艾红辉； 钟伟； 龙平； 吴英华； 胡锦芳. miR-155在变应性鼻炎患者血清中的高表达[J]. 实用临床医学, 2016, 17(11): 64-. |
|
|
|
|
