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| 屋尘螨Der p7基因的克隆表达、纯化及过敏原性鉴定 |
| 黄娜娜陈德盛常可欣关律昕杨礼腾刘志刚刘晓宇 |
| 深圳大学过敏反应与免疫学研究所深圳大学第三附属医院呼吸科和变态反应科 |
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摘要 目的探讨屋尘螨Der p7基因的克隆表达、纯化及过敏原性分析。方法逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)扩增屋尘螨Der p7基因,经酶切、连接后转化大肠杆菌,挑取阳性单克隆菌落,扩增培养后测序鉴定正确后大量表达;采用亲和层析法纯化表达产物,免疫印迹(Western blot)法鉴定其过敏原性;生物信息学方法分析其基因的同源性。结果 RT-PCR显示Der p7基因片段大小约700 bp;大量表达后进行的SDS-PAGE电泳分析显示,Der p7蛋白表达于沉淀物中,以包涵体蛋白为主,分子质量约39 kDa。Western blot显示该重组基因所表达的蛋白可与尘螨过敏患者的血清起反应,表明该重组蛋白具有过敏原性。生物信息学分析显示克隆的Der p7基因与Der f7基因的同源性约79.14%。结论本实验成功获得大量表达及纯化后具有过敏原性的Der p7蛋白,对临床上完善对过敏性疾病的检测与治疗具有积极的意义。
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| 关键词 ：
屋尘螨,
Der p7基因,
表达,
纯化,
过敏原性
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| 基金资助:国家自然科学基金(31729002、81628001)； 广东省科技计划项目(2013B031800023、2014B090901041、2016A020216029)； 深圳市孔雀团队项目(KQTD20170331145453160)； 广州市科学研究计划重点项目(201804020043)； 呼吸疾病国家重点实验室开放基金(SKLRD2016ZJ001)； 深圳市科技计划基础研究项目(JCYJ20160328144536436、JCYJ20160429114659119)； |
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