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| 粉尘螨过敏原Der f15的表达、纯化和生物信息学分析 |
| 胡维； 詹政科； 刘玉琳； 喻海琼； 杨小猛； 刘晓宇 |
| 深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所； 南昌大学基础医学院免疫学教研室 |
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| HU Wei;ZHAN Zheng-ke;LIU Yu-lin;YU Hai-qiong;YANG Xiao-meng;LIU Xiao-yu |
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摘要 目的表达纯化出粉尘螨过敏原Der f15蛋白,并预测其三维结构及B细胞抗原表位。方法利用实验室已有的Der f15质粒转化到大肠杆菌Rosetta,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过亲和层析纯化蛋白,经免疫印迹法(Western-blot)分析Der f15免疫原性,用生物信息学方法分析Der f15的三维结构及B细胞抗原表位。结果高效表达出Der f15蛋白。SDS-PAGE结果显示:表达的产物分子量约107ku。经亲和层析成功纯化蛋白,纯化蛋白以尘螨过敏患者血清为一抗进行Western-blot,结果显示:Der f15重组蛋白能与患者血清IgE发生特异性结合,而阴性对照没有反应条带出现,表明Der f15具有良好的抗原性。对B细胞抗原表位的预测表明,Der f15蛋白的第20~35、121~131、340~359及485~500是潜在B细胞抗原表位。结论粉尘螨Der f15表达、纯化和生物信息学分析研究有助于了解Der f15蛋白的分子生物学特性,为粉尘螨过敏反应性疾病的特异性诊断和疫苗治疗奠定理论基础。 更多还原
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| 关键词 ：
粉尘螨,
Der f15,
表达,
免疫印迹法
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| 基金资助: 国家自然科学基金(31328014、31400786);广东省高等学校国际暨港澳台科技合作创新平台项目(2012gjhz0009);深圳市科技计划国际科技合作项目(GJHZ20130408174112021);深圳市科技计划项目(JCYJ20130329110735981、JCYJ20120613173233810);深圳市南山区研发项目(KC2012JSYB0003A) |
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2015, Vol. 55 
