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| 翘嘴鳜铜锌超氧化物歧化酶基因的分子克隆与原核表达 |
| 程周玉； 许亮清； 胡向萍； 胡宝庆； 简少卿； 阳刚； 张明； 文春根； 宁瑞红； 王鹤 |
| 南昌大学生命科学学院； 南昌市农科院畜牧水产研究所； 江西生物科技职业学院 |
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| CHEN Zhouyu;XU Liangqing;HU Xiangping;HU Baoqing;JIAN Shaoqing;YANG Gang;ZHANG Ming;WEN Chungen;NING Ruihong;WANG He |
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摘要 运用RT-PCR和RACE-PCR技术克隆了翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)铜锌超氧化物歧化酶(命名为ScCu/Zn-SOD)基因,该基因的cDNA序列全长为804bp,开放阅读框为465bp,编码154个氨基酸。氨基酸序列中含2个Cu/Zn-SOD标签序列、7个铜锌金属结合位点、2个半胱氨酸位点和1个N-糖基化位点;其与胞内Cu/Zn-SOD(icCu/Zn-SOD)和胞外Cu/Zn-SOD(ecCu/Zn-SOD)氨基酸序列的同源性分别为60.13%~92.21%和33.77%~42.21%。在系统进化树中,ScCu/Zn-SOD与其它物种的icCu/Zn-SOD聚成一支。ScCu/Zn-SOD的蛋白晶体结构主要由2个α螺旋和8个β折叠组成,呈β折叠构象,通过结合1个Cu2+和1个Zn2+构成其酶活性中心。ScCu/Zn-SOD的mRNA在翘嘴鳜肌肉、鳃、肝脏和肾脏等组织中均有表达,且鳃中的相对表达量最高。将该基因编码蛋白序列与pET-30a表达载体重组,热激转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达,SDS-PAGE检测发现诱导后菌液的超声上清中有可溶性重组蛋白表达。
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| 关键词 ：
翘嘴鳜,
超氧化物歧化酶,
基因克隆,
原核表达
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| 基金资助: 南昌市科技支撑计划基金资助项目(2012-KJ2C-NY-SC-002);国家自然科学基金资助项目(31472305,31460697,21467015);江西省教育厅基金资助项目(GJJ12024,GJJ10378);江西省自然科学基金资助项目(20132BAB204019) |
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2015, Vol. 39 
