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JAK2调控巨噬细胞M2活化在宫颈癌微环境中的作用及机制 |
谢双双 刘苗苗 李伟 王尽轶 高月月 康燕华 |
河北北方学院附属第一医院妇产科 衡水市妇幼保健院内科 石家庄妇幼保健院急诊室 |
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摘要 目的 探讨JAK2小分子抑制剂AG490对肿瘤相关巨噬细胞(TAM)衍生外泌体(Exo)治疗后宫颈癌细胞自噬、凋亡和干性特性的影响。方法 使用佛波酯(PMA)和重组人IL-4将THP-1细胞转化为M2型TAM。采用差速离心法提取Exo,通过透射电镜和纳米颗粒跟踪技术观察Exo形态和大小分布。采用Western blot检测Exo标记物蛋白表达。采用Dil联合PKH67染色检测宫颈癌细胞系HeLa细胞对TAM衍生Exo的摄取。将HeLa细胞分为3组:对照组、Exo组和Exo+AG490组,分别用TAM衍生Exo和AG490处理各组细胞;采用流式细胞术和mRFP-GFP-LC3双荧光检测细胞凋亡、自噬情况;采用Western blot检测自噬指数(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、p62)、凋亡指标(Bax、Bcl-2、Cleavedcaspase-3)及肿瘤干细胞指数(CD133、OCT4、SOX2)的表达水平;采用肿瘤细胞颗粒形成实验检测细胞干性。结果 给予PMA和IL-4,THP-1细胞的形态发生改变,CD86的表达减少、CD206的表达增加(P <0.05)。分离的颗粒被鉴定为直径为140 nm的球形囊泡,Alix、CD63和TSG101在颗粒中有明显表达。HeLa细胞能够成功地分离和内化来自M2型TAM的Exo。与对照组比较,Exo组HeLa细胞凋亡率、GFP和mRFP荧光点、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1、Bax和caspase-3表达水平显著降低(P <0.05),p62和Bcl-2表达水平显著增加(P <0.05),细胞球状性增加;此外,CD133、OCT4、SOX2表达显著上调(P <0.05)。AG490孵育可逆转Exo组上述指标表达趋势(P <0.05)。结论 AG490可能增强M2型TAM Exo处理的宫颈癌细胞自噬诱导的凋亡,抑制宫颈癌的致瘤特性。
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关键词 :
宫颈癌,
Janus激酶2,
AG490,
肿瘤相关巨噬细胞,
外泌体,
自噬性凋亡
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基金资助: 河北省医学科学研究课题(20240230); |
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