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摘要 抗蛇毒血清作为抗蛇伤中毒特效药,其生产和临床应用上的局限导致很多伤者得不到及时救治。PLI（phospholipase A2 inhibitors）是蛇自身表达的解毒蛋白,它可以抑制蛇毒主要毒素PLA2进行自我保护。我们实验室前期在华游蛇中分离到一个PLIγ,它对蛇毒PLA2酶活性和出血毒均有强抑制效果。本研究通过酵母对华游蛇PLIγ进行表达。将PLIγ连接到pPICZαA表达载体,重组质粒通过电转化方式导入毕赤酵母GS115。在30℃、250r·min-1条件下,使用终浓度0.5%甲醇对筛选的转化子进行诱导,连续培养120h,每隔24h收集发酵液上清,用Western Bolt检测PLIγ表达水平,确定72h为最佳诱导时间。采用镍柱亲和层析分离纯化PLIγ,SDSPAGE检测纯度。活性实验表明:重组PLIγ对五步蛇蛇毒PLA2酶活的抑制效率为84%,并可以有效抑制其出血毒性。体外免疫共沉淀表明重组PLIγ与蛇毒sPLA2IB和IIA型均存在直接相互作用。
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| 关键词 ：
PLIγ,
蛇毒PLA2,
酵母表达,
出血毒性,
免疫共沉淀
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| 基金资助:国家自然科学基金资助项目(31260209； 31460227)； 南昌大学研究生创新基金资助项目(cx2015182)； |
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