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| 基于AIEgens增强的CRISPR/Cas12a荧光探针设计及在单核细胞增生李斯特菌快速检测中的应用 |
| 南昌大学食品科学与资源挖掘国家重点实验室 福州金域医学检验实验室有限公司3.南昌大学中德联合研究院 |
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摘要 研制了一种基于聚集诱导发光染料（aggregation-induced emission fluorogens, AIEgens）增强的荧光探针，建立了基于重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification, RPA）结合CRISPR/Cas12a高灵敏检测单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）的新方法。利用阳离子AIEgens与双链DNA结合荧光极大增强的特性，构建了一种含双链以及单链DNA的探针。该探针5’末端携带一个荧光淬灭基团，双链DNA片段结合了多个AIEgens;利用crRNA可准确识别靶标序列并激活Cas12a反式切割活性的特点，切割荧光探针单链DNA产生荧光信号，从而实现LM高灵敏检测。将AIEgens增强型荧光探针与CRISPR/Cas12a结合，在无扩增情况下检测DNA片段的检出限为0.37 pmol·L-1,灵敏度较传统荧光探针高40倍。将以上检测体系与RPA反应联用，检测LM的检出限为3×10～1 CFU·mL-1;该方法检测人工污染LM的牛奶以及金针菇样本，批内以及批间平均回收率介于91.14%～108.47%,变异系数小于12.71%。构建了一种基于AIEgens增强的CRISPR/Cas荧光探针，极大地提高了基于荧光信号输出的CRISPR/Cas方法检测灵敏度，实现了食源性致病菌的高灵敏检测。
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| 关键词 ：
CRISPR/Cas12a,
聚集诱导发光分子,
单核细胞增生李斯特菌,
食源性致病菌,
快速检测
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| 基金资助:国家重点实验室资助项目(20232BCD44004)； 江西省重点研发计划(20232BBG70030)； |
| [1] |
陈春丽方豫黄灵光戴星照朱腾高方小伟陈焕文龚娴. 电喷雾萃取电离质谱法(LTQ-EESI-MS)快速筛选水环境中重金属[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2017, 41(02): 142-. |
| [2] |
杜佳炜张国文. 金银合金纳米粒子的制备及其在比色检测水中Cr3+的应用[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2017, 41(01): 52-. |
| [3] |
段学辉; 魏斌; 傅奇; 郭炳其; 贾奎艳. 用细胞培养瓶法快速检测大肠菌群[J]. 南昌大学学报（工科版）, 2011, 33(03): 1-. |
| [4] |
王素青. 糖尿病高危人群血糖快速检测分析[J]. 实用临床医学, 2010, 11(12): 1-. |
| [5] |
徐尔尼; 刘文群; 于化泓. 免疫珠技术快速检测腹泻性大肠杆菌[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2003, 27(02): 1-. |
| [6] |
徐尔尼; 许杨; 刘文群; 陈志文. 快速检测大肠菌群数的研究[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2001, 25(04): 1-. |
| [7] |
杨伟华. 胸水中检出恶性肿瘤细胞一例报告[J]. 南昌大学学报（医学版）, 1999, 41(01): 1-. |
| [8] |
杨伟华; 蔡恒. 混合单抗快速检测肺癌的临床价值[J]. 南昌大学学报（医学版）, 1998, 40(04): 1-. |
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