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| 自制ISCOMATRIX与CpG联合的HCA587蛋白疫苗的制备及其免疫效应评估 |
| 谭媛芳 陈惠媛 焦薇 范秋颖 邵国青 熊祺琰 陈娟娟 |
| 南昌大学第二附属医院检验科,江西省检验医学重点实验室 江苏省农业科学院兽医研究所,农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心 |
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摘要 目的 确定自制免疫刺激复合物(ISCOMATRIX)作为HCA587蛋白疫苗佐剂的有效剂量，并探讨其与CpG联合作为HCA587蛋白疫苗佐剂的免疫效力和肿瘤治疗效果。方法 应用透析法将Quil A、胆固醇和磷脂制备成ISCOMATRIX,经磷钨酸负染并采用透射电子显微镜观察自制ISCOMATRIX的结构。建立小鼠免疫模型，将联合CpG的HCA587蛋白疫苗与不同剂量的自制ISCOMATRIX佐剂混合，经尾根部皮下免疫小鼠；采用酶联免疫斑点试验(ELISpot)检测产生IFN-γ的脾细胞频数，采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清HCA587特异性抗体水平。在小鼠右侧胁腹部皮下接种B16-HCA587肿瘤细胞建立荷瘤小鼠模型，按照处理方式不同将小鼠分为HCA587蛋白疫苗治疗组(接种100μL包含CpG与最佳剂量的自制ISCOMATRIX的HCA587蛋白疫苗)与PBS对照组(注射100μL的无菌PBS),使用游标卡尺测量肿瘤大小。结果 自制ISCOMATRIX佐剂呈典型的蜂窝状结构，直径20～30 nm,大小均一。12、36μg(QuilA浓度分别为0.012%、0.036%)的自制ISCOMATRIX组小鼠脾细胞分泌IFN-γ的频数与商品化ISCOMATRIX阳性对照组比较，差异无统计学意义(均P>0.05),且显著高于CpG+36μg ISCOM对照组与PBS组(均P<0.000 1); 5μg与18μg自制ISCOMATRIX组小鼠分泌IFN-γ的脾细胞频数，高于CpG+36μg ISCOM对照组与PBS组(均P<0.000 1),但低于商品化ISCOM组(P=0.004)。12、18与36μg自制ISCOMATRIX组的血清HCA587抗体水平与商品化ISCOM阳性对照组比较，差异无统计学意义(均P>0.05);与PBS组相比，12μg自制ISCOMATRIX组1×104倍稀释血清的抗体滴度显著升高(P=0.006 2)。与PBS对照组相比，HCA587蛋白疫苗治疗组肿瘤生长速度减缓，且第35天测量时肿瘤大小显著较小(P=0.018 1)。结论 以12μg自制ISCOMATRIX作为佐剂联合CpG制备的HCA587蛋白疫苗能诱导有效的免疫应答，并抑制荷瘤小鼠的肿瘤的生长，具有一定的肿瘤治疗作用。
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| 关键词 ：
免疫刺激复合物(ISCOMATRIX),
自行制备,
CpG,
HCA587蛋白疫苗,
免疫效应
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| 基金资助:国家自然科学基金(82160314； 81960497)； |
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