|
|
|
| 高亲和力抗eGFP纳米抗体的筛选与应用 |
| 刘晓芳 刘贝 周方月 黄云祥 钟引凤 张茹云 梁宇芳 王丹 付金衡 |
| 南昌大学生命科学学院 南昌大学中德联合研究院 江西农业大学 |
|
|
|
|
摘要 将增强型绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein, eGFP）免疫羊驼后构建纳米抗体免疫库,固相淘选eGFP纳米抗体;构建E.coli Rosetta表达载体,诱导表达纳米抗体,并鉴定其结合活性及特异性;辣根过氧化物酶（Horseradish peroxidase, HRP）标纳米抗体,确定其工作浓度及稳定性;将纳米抗体与纳米磁珠偶联应用于免疫沉淀B13-EGFP融合蛋白。四免后抗血清滴度超过1.28×106,获得库容量为1.85×108 cfu的抗eGFP纳米抗体噬菌体展示文库;原核表达10种独特基因序列的纳米抗体,均为可溶性表达;采用ForteBio Octet确定出纳米抗体4-28与eGFP的亲和常数（KD）最高,达到9.67×10-11M;纳米抗体4-28与eGFP、绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP）特异性结合;HRP标记纳米抗体4-28检测范围是1:10 000～1:25 000(浓度100～40 ng·mL-1),比市场上现有的检测二抗（稀释范围1:5 000～1:20 000）灵敏度更高;纳米抗体4-28偶联羧基化纳米磁珠,免疫沉淀B13-eGFP融合蛋白,实现了简单快速分离目的蛋白B13-eGFP。
|
|
| 关键词 ：
纳米抗体,
eGFP,
噬菌体展示,
ELISA,
IP
|
|
|
| 基金资助:国家自然科学基金资助项目（31471648）； |
| [1] |
陶书马维凤陈鹏玉. 中立型变时刻脉冲发展方程mild解的存在唯一性[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2021, 45(1): 6-. |
| [2] |
钟引凤 刘晓芳 刘贝 黄云祥 何庆华 李燕萍 涂追 刘琼 付金衡. 抗幽门螺杆菌尿素酶B纳米抗体的制备及鉴定[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2021, 45(1): 41-. |
| [3] |
刘君刘凤妹. Triport单孔腹腔镜经阴道入路子宫全切术的可行性及安全性[J]. 实用临床医学, 2020, 21(7): 36-. |
| [4] |
车卫华. 布地奈德气雾剂联合BiPAP呼吸机治疗慢性阻塞性肺气肿合并Ⅱ型呼吸衰竭的效果[J]. 实用临床医学, 2020, 21(6): 15-. |
| [5] |
孟旭东 周蓉. 参数强向量原始与对偶均衡问题解映射的Lipschitz连续性[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2020, 44(4): 313-. |
| [6] |
杨叶民 胡文进 何庆华. 抗IgG-Fc蛋白ssDNA适配体的筛选与鉴定[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2020, 44(4): 340-. |
| [7] |
黎先财郑嵩田明磊. 铑离子表面印迹聚合物Rh-IIP-MAA/MCM-41的制备及其吸附性能[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2020, 44(2): 143-. |
| [8] |
刘亮渠艳霞本少杰. SLIPA喉罩对隆乳术全身麻醉患者麻醉效果及应激反应的影响[J]. 实用临床医学, 2020, 21(12): 27-. |
| [9] |
黎先财月隆隆胡全红郑嵩田明磊. Rh-IIP-MAA/MCM-41印迹聚合物铑离子吸附动力学及热力学分析[J]. 南昌大学学报（工科版）, 2019, 41(4): 307-. |
| [10] |
陈东锋邱伟群李耀邦胡梓生. 慢性阻塞性肺疾病合并Ⅱ型呼吸衰竭患者使用BiPAP呼吸机通气的疗效[J]. 实用临床医学, 2018, 19(6): 19-. |
| [11] |
何星星余伟姚树坤谢步善. 苦参碱诱导肝癌HepG2细胞自噬的作用与机制[J]. 南昌大学学报（医学版）, 2018, 58(2): 1-. |
| [12] |
周波陶元丰. 硝普钠联合BiPAP呼吸机治疗高血压合并急性左心功能衰竭的效果[J]. 实用临床医学, 2017, 18(09): 7-. |
| [13] |
张道达付斌孙衍乐尧登灿付立铭单爱党. 大变形异步-同步轧制超细晶TWIP钢的组织及变形性行为[J]. 南昌大学学报（理科版）, 2017, 41(04): 368-. |
| [14] |
李慧芬黄维华范晓兰. 肿瘤转移抑制基因Tip30/CC3的研究进展[J]. 实用临床医学, 2017, 18(01): 106-. |
| [15] |
杜建胜； 毛国华； 朱建明； 赖贤良； 高子云； 宋书欣； 祝新根. Pipeline血流导向装置治疗颅内大型动脉瘤1例[J]. 南昌大学学报（医学版）, 2016, 56(04): 103-. |
|
|
|
|
