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| 活化转录因子ATF1、ATF2对USP22基因启动子活性的调节 |
| 刘建云； 周小鸥； 吴萍； 熊建军 |
| 九江学院基础医学院江西省系统生物医学重点实验室； 九江学院基础医学院药理教研室 |
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| LIU Jian-yun;ZHOU Xiao-ou;WU Ping;XIONG Jian-jun |
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摘要 目的克隆人活化转录因子ATF1基因和ATF2基因蛋白编码序列,分别构建真核细胞表达载体,进而研究高表达ATF1和ATF2对泛素水解酶22(ubiquitin-specific processing enzyme 22,USP22)基因启动子转录活性的影响。方法 RT-PCR扩增ATF1基因和ATF2基因蛋白编码序列,分别与pVAX1真核表达载体连接;测序、酶切鉴定重组载体;Western Blot检测外源性ATF1和ATF2在靶细胞Hela细胞中的表达;pVAX1-ATF1、pVAX1-ATF2分别与含野生型USP22启动子的萤光素酶报告质粒或其CREB位点突变体质粒共转染,双萤光素酶报告系统检测萤光素酶活性的表达。结果重组质粒pVAX1-ATF1、pVAX1-ATF2构建成功,外源性ATF1、ATF2在Hela细胞内有效表达;转染pVAX-ATF1促进USP22启动子活性升高(83%±11%),转染pVAX-ATF2促进USP22启动子活性升高约(52%±8%);而突变CREB位点均可导致上升作用的消失。结论成功构建了ATF1、ATF2真核表达质粒,高表达外源性ATF1和ATF2均可通过CREB位点激活USP22启动子的转录活性。
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| 关键词 ：
ATF1,
ATF2,
USP22基因,
启动子,
萤光素酶
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| 基金资助: 国家自然科学基金(31000581,81460172) |
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2016, Vol. 56 
