人PPARγ基因过表达重组腺病毒载体的构建及鉴定

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摘要目的构建人的过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)基因的重组腺病毒载体。方法从人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中提取并扩增人PPARγcDNA目的片段,将该目的片段经AgeⅠ/NheⅠ酶切后插入经相同内切酶酶切后表达质粒(CMV-MCS-SV40-EGFP)得到重组穿梭质粒;再将该重组穿梭质粒与AdMax腺病毒包装系统的骨架质粒(pBHG loxΔE1,3Cre)经Cre/loxP酶切重组,构建重组腺病毒(Ad-PPARγ);最后,将Ad-PPARγ感染HEK293T细胞,进行病毒的包装、扩增、纯化及滴度检测。结果通过PCR鉴定及基因测序分析,PPARγ过表达重组腺病毒载体构建成功;Western blot结果显示经包装及纯化的Ad-PPARγ感染HUVECs后,可显著上调HUVECs中PPARγ基因的表达。结论PPARγ过表达重组腺病毒载体构建成功,且能有效上调HUVECs中PPARγ基因的表达。

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关键词 ：过氧化物酶体增殖物激活受体, 重组腺病毒载体, 基因重组, AdMax腺病毒包装系统

基金资助:

国家自然科学基金(81360060,81070633);江西省主要学科学术和技术带头人培养计划项目(20123BCB22005)

引用本文:

李腾；李琼；严国强；储佳佳；沈小丹；温见炳；黄起壬；钟荣梅. 人PPARγ基因过表达重组腺病毒载体的构建及鉴定[J]. 南昌大学学报（医学版）, 2015, 55(03): 19-.
LI Teng;LI Qiong;YAN Guo-qiang;CHU Jia-jia;SHEN Xiao-dan;WEN Jian-bing;HUANG Qi-ren;ZHONG Rong-mei. . , 2015, 55(03): 19-.

链接本文:

http://qks.ncu.edu.cn/Jwk_xbyxb/CN/ 或 http://qks.ncu.edu.cn/Jwk_xbyxb/CN/Y2015/V55/I03/19